ATCC細胞在凍存操作時需使用手套，工作服和防護面具以避免任何事故發(fā)生。檢查包裝，查看是否有任何破裂或滲漏。凍存的ATCC細胞株應處于固體狀。將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出，立即復蘇培養(yǎng)，或迅速轉(zhuǎn)移放置在液氮罐存儲。
ATCC細胞的復蘇和培養(yǎng)操作：
1.準備好細胞培養(yǎng)皿或細胞培養(yǎng)瓶，及產(chǎn)品說明推薦的相應細胞培養(yǎng)基。并在37℃水浴中預先溫熱細胞培養(yǎng)基。
2.小心取出裝有細胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的晃動以幫助解凍。解凍過程應該盡快，大約短于2分鐘或待后一塊小冰晶體剛?cè)诨?，就應將細胞凍存管取出水浴?/div>
3.在從水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用無菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。
4.小心擰開凍存管的頂部，將管內(nèi)容物用1ml移液槍轉(zhuǎn)移到含9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中。離心5到7分鐘(125×g)，小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜)，避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的*培養(yǎng)基中。將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器，輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5-8ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶。生長較快的細胞株可重懸于12-20ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶。
5.將細胞培養(yǎng)容器置于細胞培養(yǎng)箱，在溫度37℃，二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進行孵育。細胞培養(yǎng)24小時后應在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長狀況。
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